CST mIHC/mIF 비교 가이드
Multiplex immunohistochemistry(mIHC)와 multiplex immunofluorescence(mIF)는
조직 내 다양한 세포 유형을 동시에 분석할 수 있는 핵심 기술입니다.
연구 목적, 실험 환경, 보유 장비에 따라 최적의 접근 방식이 달라지기 때문에 각 기술의 특징을 이해하고 상황에 맞게 선택하는 것이 중요합니다.
주요 mIHC/mIF 기술들의 특징과 장단점에 대해 알아보세요!
1. Multiplexed Chromogenic IHC
전통적 DAB/AEC 기반 IHC를 확장한 방식으로, 최신 chromogen을 활용하면 3–5개 마커를 10–15시간 내 multiplex로 분석 가능
장점
- 비용 부담이 적고 프로토콜이 익숙함
- 자동화가 용이하여 고처리량 분석에 적합
단점
- 다중 염색 가능 마커 수가 제한적
- 준정량 수준(semi-quantitative)의 신호강도
2. MICSSS (Multiplexed IHC Consecutive Staining on Single Slides)
한 번에 한 개의 마커만 염색하는 순차 반복 IHC 방식으로, 슬라이드당 최대 10개 마커 분석 가능
장점
- 마커 간 간섭(bleed-through, steric hindrance) 최소화
* bleed-through: 형광 채널 간 신호가 섞여버리는 현상
* steric hindrance: 항체들이 물리적으로 서로 접근하지 못해 결합이 방해되는 현상
단점
- 느린 처리 속도(1 cycle에 1–2일 소요)
- 반복적인 coverslip 제거와 destaining/antigen retrieval 과정에서 조직 손상 가능성
- 준정량 수준(semi-quantitative)의 신호강도
3. Multiplex IF
형광 표지 항체를 이용하여 동시에 여러 마커를 정량적으로 분석 가능
사용 장비 별 마커 수
1) 일반 형광 현미경 (epifluorescence/confocal):
보통 4–5개 마커까지 안정적으로 검출 가능
→ 서로 다른 excitation/emission 스펙트럼을 갖는 형광체 수에 제한
2) 다중분광(multi-spectral) 현미경:
약 6–8개, 플랫폼에 따라 9–10개까지도 가능
→ 분광 분리(spectral unmixing) 알고리즘을 활용해 스펙트럼이 일부 겹치는 형광도 구분 가능
3) Cyclic IF 기술(CODEX, t-CyCIF 등):
30–60개 이상의 마커 검출 가능
→ 하나의 조직에서 수십 개 이상의 단백질을 차례로 시각화
→ 공간 단일세포 지도(spatial single-cell atlas) 구축에 활용
장점
- 형광 신호는 표적이 많아질수록 신호가 그에 비례해 증가하므로, 실제 단백질 발현량에 대해 정확히 반영 가능(quantitative)
- 한 번에 여러 마커를 감지하여 시간 효율성 우수
주의사항
- 형광 스펙트럼 중복을 고려한 패널 설계 필요
- TSA (tyramide signal amplification) 증폭 사용 시 비특이 신호 가능성 검증 필요
4. Tissue-based Mass Spectrometry (MIBI-TOF, IMC)
Metal tag를 부착한 항체를 사용하여 40개 이상 마커를 동시에 분석하는 고해상도 조직 이미징 기술
장점
- 형광 기반 문제(Photobleaching, Autofluorescence, 스펙트럼 중첩) 없음
- 신호 강도 정량 분석 가능
단점
- 장비 가격이 높고 고도의 전문성 필요
- ROI 기반 분석(전체 슬라이드 스캔은 아님)
5. Digital Spatial Profiling (DSP)
UV-cleavable fluorescent DNA tag가 결합된 항체를 사용하여 40–50개 마커를 빠르게 정량 가능
장점
- 한 번의 염색으로 고다중 분석 가능
- 약 1시간 내 측정이 가능해 빠른 처리속도
- 소량의 ROI에서도 다수 마커 분석 가능
단점
- 이미지 기반 분석이 불가능(신호는 plate 기반에서 획득)
👍 다양한 mIHC/mIF 플랫폼에서 CST 항체를 사용하여 신뢰할 수 있는 결과를 얻어보세요!
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