[Cell Signaling Technology] IF Application Solution Kit

2023-05-25

– IF Application Solution Kit (#12727) 장점

1) 최상의 이미지 도출

2) Kit 1개당 100회 실험 가능

3) DIY Buffer에 대한 위험 감소

4) 시간/비용 절약

* Primary Ab/Secondary Ab는 포함되어 있지 않음

구성품	품번
10X Wash Buffer, Phosphate Buffered Saline (PBS)	12528
16% Formaldehyde, Methanol-Free	12606
Immunofluorescence Blocking Buffer	12411
Immunofluorescence Antibody Dilution Buffer	12378

– PROTOCOL

A. Sample Preparation

1. Cultured Cell Lines (IF-IC)

1) Media Suction.

2) 1X Wash Buffer에 희석된 4% Formaldehyde로 실온에서 15분 동안 Fixation.

* Primary Ab 데이터 시트에 명시된 경우 Formaldehyde대신 차가운 100% Methanol을 고정제로 사용.

3) Suction 후 1x Wash Buffer로 5분씩 3회 Wash.

* 세포는 Multi-well Plates, Chamber Slide 또는 Coverslip에서 직접 배양, 약물 처리, 고정 및 염색되어야 함.

2. Frozen/Cryostat Sections (IF-F)

1) Fixation 된 Frozen Tissue는 바로 Immunostaining (Step B) 진행.

2) Fixation 되지 않고 Fresh한 된 Frozen Tissue 는 하기의 방법으로 Fixation 진행.

① 1x Wash Buffer에 희석된 4% Formaldehyde로 실온에서 15분 동안 Fixation.

② Wash Buffer로 슬라이드를 5분씩 3번 Wash.

B. Immunostaining

1)Methanol Permeabilization :

① Wash Buffer Suction 후, Sample을 차가운 100% Methanol 에 3~5mm 깊이로 잠기게끔 첨가.

② -20°C에서 10분 동안 Incubation 후, 1X Wash Buffer에서 5분 Wash.

* 이 단계는 Primary Ab 데이터 시트에 명시된 경우에만 수행.

2) 실온에서 60분 동안 Blocking Buffer 첨가하여 Blocking.

3) Antibody Dilution Buffer에 Primary Ab Dilution.

4) Blocking Buffer Suction 후, 희석된 Primary Ab를 첨가.

5) 4°C Overnight.

6) 1x Wash Buffer로 5분씩 세 번 Wash.

* fluorochrome-conjugated Primary Ab를 사용하는 경우 (Step B, 9단계)로 진행.

7) Dark room에서 샘플을 실온에서 1 시간 동안 Antibody Dilution Buffer에 희석한 Secondary Ab Incubation.

8) 1X Wash Buffer로 5분씩 세 번 Wash.

9) ProLong® Gold Antifade Reagent (#9071) 또는 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) 와 같은 변색 방지 시약 첨가.

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