[Cell Signaling Technology] Fluorophore Antibody
Fluorophore
: 레이저나 램프와 같은 광원에 의해 특정 파장에서 빛을 흡수하고 발광하는 분자
Fluorophore Antibody
– Fluorophore 가 Conjugation 된 Antibody
– Fluorophore Ab 이용 가능한 Application : Flow Cytometry (flow), Immunofluorescence (IF)
Fluorophore Ab를 활용한 Application 특징
– 서로 다른 파장(일명 다른 색상)을 가진 다양한 Fluorophore을 사용함으로써 한 번에 여러 Target을 관찰 가능 (Multiflexing)
– 특정 단백질이나 항원의 위치, 분포, 발현을 높은 특이성과 감도를 통해 시각화하고 연구
– Flow 및 IF는 Target에 대한 항체의 Direct Conjugation 또는 Indirect Conjugation에 의해 수행
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Fluorophore Name
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Excitation (nm)
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Emission (nm)
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Color
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PE
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565
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578
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Yellow
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Alexa Fluor 555
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555
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580
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Alexa Fluor 532
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532
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554
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Bright Yellow
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Pacific Blue
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401
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452
|
Blue
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Alexa Fluor 488
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490
|
525
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Green
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FITC
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490
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525
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Alexa Fluor 594
|
590
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617
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Bright Red
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Alexa Fluor 647
|
650
|
668
|
Bright Far-red
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Alexa Fluor 700
|
696
|
719
|
Far-red
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Alexa Fluor 750
|
749
|
775
|
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APC
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650
|
660
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Cy5.5
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678
|
695
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PE-Cy5
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496
|
667
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Red
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PE-Cy7
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565
|
778
|
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PerCP
|
482
|
675
|
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PerCP-Cy5.5
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489
|
679
|
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redFluor
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684
|
704
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violetFluor
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405
|
500
|
Violet
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APC-Cy7
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650
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785
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Infrared
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Indirect Detection
– Secondary Ab 에 Fluorophore 가 Conjugation 된 형태
– 여러 Secondary Ab 가 Primary Ab 와 결합함으로써 Signal 증폭
– 다양한 형광 또는 효소가 결합된 Secondary Ab 를 사용할 수 있어 Direct Detection에 비해 높은 Flexibility
Direct Detection
– Primary Ab 에 Fluorophore 가 직접 Conjugation 된 형태
– Indirect Detection에서 Secondary Ab 사용에 의한 Signal 증폭이 일어나지 않기 때문에 상대적으로 Dim
– Conjugation 된 Primary Ab 를 사용함으로써 비특이성 결합을 줄여 상대적으로 낮은 Background
– Fluorophore가 Primary Ab 와 이미 Conjugation 되어 있으므로 Cross-reactivity 최소화
– Indirect Detection 보다 짧은 실험 소요 시간
