Cell Culture Troubleshooting Guide

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Cell Culture Troubleshooting 원인 및 해결 방안

증 상	원 인	해 결 방 안
Media 색의 비정상적인 변화	잘못된 Carbon Dioxide (CO2) 농도	Incubator 내의 CO2  농도 조정
		Sodium Bicarbonate 가 2.0~3.7 g/L일 경우에 5~10%의 CO2 사용
	원활하지 않은 산소 공급	Flask의 Cap이 꽉 조여있는지 확인 후 Cap을 1/4바퀴 느슨하게 풀기
	불충분한 Bicarbonate Buffering	최종 농도가 10~25mM이 되도록 HEPES Buffer 추가
	Medium의 잘못된 Salt	CO2 환경에서는 Earle’s Salts-based Medium사용하고 대기 조건에서는 Hanks’ Salts-based Medium 사용
	Bacteria, Yeast, Fungi 오염	해결 방안 없음 Cell과 Media를 버리고 재배양 권장 (Antibiotics 첨가 필수, BSC와 CO2 Incubator 청소)

 

증 상	원 인	해 결 방 안
Media에 침전물	Bacteria, Yeast, Fungi 오염	해결 방안 없음 Cell과 Media를 버리고 재배양 권장 (Antibiotics 첨가 필수, BSC와 CO2 Incubator 청소)
	Frozen Serum	– Serum을 Filtering 한 후 사용 – 올바른 방법으로 해동

 

증 상	원 인	해 결 방 안
Plate에 Cell이 부착되지 않은 경우	과도한 양의 Trypsin 처리	Trypsin 처리 시간 줄이거나 양 줄이기
	Mycoplasma 오염	Mycoplasma Infection Test 후드와 Incubator 청소
	Media에 부착 요소가 없을 경우	Serum-free의 경우 부착 요소가 조성에 포함되어 있는지 확인
	Cell에 맞지 않은 Plate 사용	Cell Type (Adherent Cell, Difficult Adherent Cell, Suspension Cell) 마다 사용 가능한 Plate의 종류가 다르기 때문에 확인 후 알맞은 Plate 사용

 

증 상	원 인	해 결 방 안
Cell 성장 감소	부적절한 Media와 Serum 사용	– 사용 중인 Media의 Formulation 확인   (Glucose, Amino Acids,  Components 등) – Cell Growth 실험에서 Serum의 이전 Lot과 새 Lot 비교 – 적절한 Media 사용
	세포가 제대로 얼거나 해동되지 않았을 경우	– 세포 장기 보관 시 질소탱크(-180°C)에서 보관 – 세포 해동 시, 최대한 빠르게 Step 진행
	갑작스런 Serum Change	Seum Change시, 세포가 새로운 Serum에 적응할 수 있도록 기존 Serum에 새로운 Serum의 비율을 점차적으로 늘려 배양
	Plate 면적 대비 적은 양의 Cell	세포 간의 상호작용이 원활하게 일어날 수 있도록 Cell 양 조절