면역학 연구를 위한 BD Biosciences T-Cell Research 가이드
T-Cell Subtypes cytotoxic T cells / helper T cells(Th) / regulatory T cells(Tregs)
아래 표는 주요 T세포의 마커 정보를 한눈에 볼 수 있도록 정리한 내용입니다.
| Type of Cell | Cytotoxic | Th1 | Th2 | Th95 | Th17 | Tfh6 | Treg |
| 주요 기능 | 바이러스 감염 세포 사멸 (Kill virus-infected cells) |
감염된 대식세포의 미생물 살상 기능 활성화 및 B세포의 항체 생성 도움 (Activate microbicidal function of infected macrophages, and help B cells to produce antibody) |
B세포의 항체 형질 전환 도움 (Help B cells and switch antibody isotype production) |
T세포 증식 및 B세포의 IgG·IgE 생성 촉진 (T cell proliferation and enhanced IgG and IgE production by B cells) |
호중구 반응 강화 (Enhance neutrophil response) |
항원 특이적 B세포 발달 및 항체 생성 조절 (Regulate development of antigen-specific B cell development and antibody production) |
면역 조절 (Immune regulation) |
| Extracellular Markers | CD8 | CD4 CXCR3 | CD4 CCR4, Crth2 (human) | CD4 | CD4, CCR6 | CD4, CXCR5 | CD4, CD25 |
| Differentiation Cytokines | IFN-γ, IL-2, IL-12, IL-18, IL-27 | IL-4, IL-2, IL-33 | IL-4, TGF-β | TGF-β, IL-6, IL-1, IL-21, IL-23 | IL-12, IL-6 | TGF-β, IL-12 | |
| Effector Cytokines | IFN-γ, TNF, LT-α | IFN-γ, LT-α, TNF | IL-4, IL-5, IL-6, IL-13 | IL-9, IL-10 | IL-17A, IL-17F, IL-21, IL-22, IL-26, TNF, CCL20 | IL-21 | TGF-β, IL-10 |
| Transcription Factors | T-bet, STAT1, STAT6 | GATA3, STAT5, STAT6 | GATA3, Smads, STAT6 | RORγt, RORα, STAT3 | Bcl-6, MAF | FoxP3, Smad3, STAT5 |
세포 환경, 분화 상태 등 다양한 요인에 따라 마커의 발현이 달라질 수 있습니다. 붉은색(red)으로 표시된 분자는 BD Biosciences에서 제공하는 Reagent(시약)입니다.
T-Cell Research Platforms
🧬 세포 표면 마커(Cell Surface Markers): heterogeneous sample에서 특정 세포를 구별하기 위한 지표
고유한 세포 표면 특성을 이용한 Cell Phenotyping
T세포와 그 하위 아형(subset)은 CD3, CD4, CD8, CD25, CD127, CD196(CCR6)과 같은 세포 표면 마커의 발현 차이에 따라 구분할 수 있습니다.
또한 CD197(CCR7), CD62L, CD69, CD45RO 등의 마커를 함께 분석하면 세포가 체내에서 이동하거나 특정 부위에 자리 잡는 능력(homing/localization)과 T세포의 활성화 상태를 파악할 수 있습니다. 이 정보는 다양한 기억세포(memory T-cell) subset을 구분하는 데에도 활용됩니다.
BD Horizon™ Brilliant Violet 및 Brilliant Ultraviolet 형광염료를 활용하면 보다 많은 마커를 포함한 대규모 분석 패널을 구성할 수 있습니다.
이를 통해 소량의 귀중한 샘플에서도 풍부한 면역학적 데이터를 얻을 수 있으며, 아래의 13색(panel) 예시는 여러 T세포 아형의 기억 및 활성화 상태를 동시에 분석한 결과입니다.
| Marker | Fluorochrome | Purpose |
| Viability dye | V500 | Viability |
| CD3 | PerCP-Cy5.5 | T cell marker |
| CD4 | BUV395 | T cell subsetting |
| CD8 | FITC | T cell subsetting |
| CD127 | Alexa Fluor® 647 | RegulatoryTCell Marker |
| HLA-DR | APC-H7 | Activation |
| CD45RO | PE-Cy7 | Memory |
| CD197 (CCR7) | BV421 | Naïve/Memory |
| CD38 | BV605 | Activation |
| CD27 | BV786 | Memory |
| CD25 | PE-CF594 | Regulatory T Cell
Marker/Activation |
| CD196 (CCR6) | PE | Th17 Cell Marker |
| CXCR3 | Alexa Fluor® 700 | Th1 Cell Marker |
🧬 세포 내 유세포분석 (Intracellular Flow Cytometry): T세포 분화를 연구하기 위한 강력한 분석 tool
세포 내 염색의 기본 원리
| BD Cytofix/Cytoperm™
: fixation/permeabilization solution – 다양한 Cytokines 및 Cell surface marker staining 목적으로 사용 |
BD Pharmingen™
: transcription factor buffer set – Transcription factor 단독 혹은 Cell surface marker, cytokines과 혼합되어 있는 Transcription factor staining 목적으로 사용 |
BD Phosflow™
: permeabilization buffer III – Phosphoepitope 검출을 위한 Flow cytometry 분석 시 Permeabilization 목적으로 사용 |
🧪 BD™ Cytometric Bead Array (CBA): 샘플에서 분비된 사이토카인을 정량적으로 측정하기 위한 분석법
CBA Technology
: secreted cytokine을 검출하는 기술
CBA products 장점
– 여러 cytokine을 동시에 분석 가능 (multiplexing)
– 소량의 샘플로도 Quantitative Result 획득 가능
– 타사 제품 대비 분석 소요 시간이 짧음
*CBA vs. ELISA vs. ICS 비교 *intracellular cytokine staining (ICS)
| CAPABILITY | CBA | ELISA | ICS |
| Allows detection of multiple cytokines in same experiment | ✓ | ✓ | |
| Can obtain phenotype of specific cells expressing cytokine of interest | ✓ | ||
| Can measure quantity of cytokine secreted | ✓ | ✓ |
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