Cell Culture Troubleshooting Guide
2021-12-10
Cell Culture Troubleshooting 원인 및 해결 방안
증 상 | 원 인 | 해 결 방 안 |
Media 색의
비정상적인 변화 |
잘못된 Carbon Dioxide (CO2) 농도 | Incubator 내의 CO2 농도 조정 |
Sodium Bicarbonate 가 2.0~3.7 g/L일 경우에
5~10%의 CO2 사용
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원활하지 않은 산소 공급 |
Flask의 Cap이 꽉 조여있는지 확인 후 Cap을 1/4바퀴
느슨하게 풀기
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불충분한 Bicarbonate Buffering | 최종 농도가 10~25mM이 되도록 HEPES Buffer 추가 | |
Medium의 잘못된 Salt
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CO2 환경에서는 Earle’s Salts-based Medium사용하고
대기 조건에서는 Hanks’ Salts-based Medium 사용
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Bacteria, Yeast, Fungi 오염 |
해결 방안 없음
Cell과 Media를 버리고 재배양 권장
(Antibiotics 첨가 필수, BSC와 CO2 Incubator 청소)
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증 상 | 원 인 | 해 결 방 안 |
Media에 침전물 | Bacteria, Yeast, Fungi 오염 |
해결 방안 없음
Cell과 Media를 버리고 재배양 권장
(Antibiotics 첨가 필수, BSC와 CO2 Incubator 청소)
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Frozen Serum |
– Serum을 Filtering 한 후 사용
– 올바른 방법으로 해동
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증 상 | 원 인 | 해 결 방 안 |
Plate에 Cell이
부착되지 않은 경우 |
과도한 양의 Trypsin 처리 | Trypsin 처리 시간 줄이거나 양 줄이기 |
Mycoplasma 오염
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Mycoplasma Infection Test
후드와 Incubator 청소
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Media에 부착 요소가 없을 경우 | Serum-free의 경우 부착 요소가 조성에 포함되어 있는지 확인 | |
Cell에 맞지 않은 Plate 사용 | Cell Type (Adherent Cell, Difficult Adherent Cell, Suspension Cell) 마다 사용 가능한 Plate의 종류가 다르기 때문에 확인 후 알맞은 Plate 사용 |
증 상 | 원 인 | 해 결 방 안 |
Cell 성장 감소 | 부적절한 Media와 Serum 사용 |
– 사용 중인 Media의 Formulation 확인
(Glucose, Amino Acids, Components 등)
– Cell Growth 실험에서 Serum의 이전 Lot과 새 Lot 비교
– 적절한 Media 사용
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세포가 제대로 얼거나
해동되지 않았을 경우
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– 세포 장기 보관 시 질소탱크(-180°C)에서 보관
– 세포 해동 시, 최대한 빠르게 Step 진행
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갑작스런 Serum Change | Seum Change시, 세포가 새로운 Serum에 적응할 수 있도록 기존 Serum에 새로운 Serum의 비율을 점차적으로 늘려 배양 | |
Plate 면적 대비 적은 양의 Cell | 세포 간의 상호작용이 원활하게 일어날 수 있도록 Cell 양 조절 |