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[FAQ] Hyclone Fetal Bovine Serum(FBS)에 침전물이 보이는데 사용해도 괜찮을까요???

2021-07-21
Fetal Bovine Serum(FBS)에 침전물이 보이는데 사용해도 괜찮을까요???


세포배양에 사용하는 FBS 및 여러 혈청 제품들 (Calf, Porcine, Equine Serum 등)에는 여러 종류의 침전물이 형성될 수 있습니다.
콜레스테롤의 지방 에스테르나 일부 단백질으로 구성된 침전물 외에도 피브린과 인산칼슘으로 인한 침전물 형성도 일반적입니다.
이런 침전물은 연구자의 우려와 달리, 세포배양에서 혈청의 성능에 영향을 주지 않습니다.

•주요 침전물 형태
보체종류 형태
피브린 (Fibrin)* 1~2mm 까지의 눈에 보이는 크기의 침전물 형성
인산칼슘(Calcium Phosphate) 혈청을 혼탁하게 만드는 형태 도립현미경으로 관찰할 때,
작고 검은 점으로 관찰되며, 브라운 운동으로 인해서 움직이기 때문에 미생물 오염으로 오해할 수 있음
*피브린 : 혈액응고과정을 유발하는 단백질.
전구체인 피브리노겐(Fibrinogen)으로 존재하다가 응고 과정이 시작되면 피브린으로 변형됨

•침전물 증가의 다양한 원인
-혈청의 열 불활성화 처리
-37ºC에서의 장시간 warming
-동결 및 해동 과정의 반복
-내용물을 섞지 않은 상태로 해동
-감마선 조사
-2ºC ~ 8ºC에서 장기 보관
-자동 서리제거 기능이 있는 냉장고에서 보관

•인산칼슘 침전물일까? 미생물 오염일까?
침전물인지 미생물 오염인지 확인하고자 할 경우, 미생물이 자랄 수 있는 한천 배지(LB 배지)를 준비합니다. 오염이 의심되는 혈청을 1mL 정도 도말하고,
37ºC에 배양합니다. 미생물의 콜로니가 형성되는지 여부를 관찰하여 오염을 확인합니다.
혹은 그람염색법을 사용하여 오염 여부를 확인할 수 있습니다.

•재여과(Re-fitration)
일반적으로 Hyclone은 세포배양을 위한 혈청의 재여과 과정을 권장하지 않습니다.
이미 100nm 혹은 40nm 사이즈 필터로 1~3회 여과하여 생산되었기 때문에 일반적인 실험실 환경에서는 다시 여과할 필요가 없습니다.