[FAQ] Hyclone Fetal Bovine Serum(FBS)에 침전물이 보이는데 사용해도 괜찮을까요???
2021-07-21
Fetal Bovine Serum(FBS)에 침전물이 보이는데 사용해도 괜찮을까요???
세포배양에 사용하는 FBS 및 여러 혈청 제품들 (Calf, Porcine, Equine Serum 등)에는 여러 종류의 침전물이 형성될 수 있습니다.
콜레스테롤의 지방 에스테르나 일부 단백질으로 구성된 침전물 외에도 피브린과 인산칼슘으로 인한 침전물 형성도 일반적입니다.
이런 침전물은 연구자의 우려와 달리, 세포배양에서 혈청의 성능에 영향을 주지 않습니다.
•주요 침전물 형태
*피브린 : 혈액응고과정을 유발하는 단백질.
전구체인 피브리노겐(Fibrinogen)으로 존재하다가 응고 과정이 시작되면 피브린으로 변형됨
•침전물 증가의 다양한 원인
-혈청의 열 불활성화 처리
-37ºC에서의 장시간 warming
-동결 및 해동 과정의 반복
-내용물을 섞지 않은 상태로 해동
-감마선 조사
-2ºC ~ 8ºC에서 장기 보관
-자동 서리제거 기능이 있는 냉장고에서 보관
•인산칼슘 침전물일까? 미생물 오염일까?
침전물인지 미생물 오염인지 확인하고자 할 경우, 미생물이 자랄 수 있는 한천 배지(LB 배지)를 준비합니다. 오염이 의심되는 혈청을 1mL 정도 도말하고,
37ºC에 배양합니다. 미생물의 콜로니가 형성되는지 여부를 관찰하여 오염을 확인합니다.
혹은 그람염색법을 사용하여 오염 여부를 확인할 수 있습니다.
•재여과(Re-fitration)
일반적으로 Hyclone은 세포배양을 위한 혈청의 재여과 과정을 권장하지 않습니다.
이미 100nm 혹은 40nm 사이즈 필터로 1~3회 여과하여 생산되었기 때문에 일반적인 실험실 환경에서는 다시 여과할 필요가 없습니다.
세포배양에 사용하는 FBS 및 여러 혈청 제품들 (Calf, Porcine, Equine Serum 등)에는 여러 종류의 침전물이 형성될 수 있습니다.
콜레스테롤의 지방 에스테르나 일부 단백질으로 구성된 침전물 외에도 피브린과 인산칼슘으로 인한 침전물 형성도 일반적입니다.
이런 침전물은 연구자의 우려와 달리, 세포배양에서 혈청의 성능에 영향을 주지 않습니다.
•주요 침전물 형태
보체종류 | 형태 |
피브린 (Fibrin)* | 1~2mm 까지의 눈에 보이는 크기의 침전물 형성 |
인산칼슘(Calcium Phosphate) | 혈청을 혼탁하게 만드는 형태
도립현미경으로 관찰할 때, 작고 검은 점으로 관찰되며, 브라운 운동으로 인해서 움직이기 때문에 미생물 오염으로 오해할 수 있음 |
전구체인 피브리노겐(Fibrinogen)으로 존재하다가 응고 과정이 시작되면 피브린으로 변형됨
•침전물 증가의 다양한 원인
-혈청의 열 불활성화 처리
-37ºC에서의 장시간 warming
-동결 및 해동 과정의 반복
-내용물을 섞지 않은 상태로 해동
-감마선 조사
-2ºC ~ 8ºC에서 장기 보관
-자동 서리제거 기능이 있는 냉장고에서 보관
•인산칼슘 침전물일까? 미생물 오염일까?
침전물인지 미생물 오염인지 확인하고자 할 경우, 미생물이 자랄 수 있는 한천 배지(LB 배지)를 준비합니다. 오염이 의심되는 혈청을 1mL 정도 도말하고,
37ºC에 배양합니다. 미생물의 콜로니가 형성되는지 여부를 관찰하여 오염을 확인합니다.
혹은 그람염색법을 사용하여 오염 여부를 확인할 수 있습니다.
•재여과(Re-fitration)
일반적으로 Hyclone은 세포배양을 위한 혈청의 재여과 과정을 권장하지 않습니다.
이미 100nm 혹은 40nm 사이즈 필터로 1~3회 여과하여 생산되었기 때문에 일반적인 실험실 환경에서는 다시 여과할 필요가 없습니다.